Как следует из данных таблицы, n-гептилпенициллин менее активен, чем остальные типы пенициллинов. Это, по-видимому, связано с тем, что n-
гептилпенициллин значительно быстрее инактивируется в организме.
Чувствительные к пенициллину микроорганизмы относительно легко и быстро приобретают устойчивость к антибиотику. Так, Staph. aureus
прекращает развитие при концентрации пенициллина 0,05 – 0,06 ед./мл в среде, но уже при 20 последовательных пересевах с постепенно
увеличивающимися концентрациями антибиотика устойчивость стафилококка возрастает в 700 раз, т. е. для остановки роста бактерии требуется
концентрация пенициллина равная 42 ед./мл, а после 40 пересевов его устойчивость возрастает более чем в 5500 раз.
Микроорганизмы, приобретшие устойчивость к одному из типов пенициллина, как правило, резистентны и к другим типам пенициллина.
У некоторых бактерий устойчивость к пенициллинам сопровождается способностью образовывать пенициллиназу.
В ряде случаев микроорганизмы с приобретением устойчивости к пенициллину теряют вирулентность. Но вирулентность восстанавливается
после нескольких пассажей через животных и при этом сохраняется резистентность к антибиотикам.
Различные типы пенициллинов и строение их радикалов
Название пенициллина
Строение радикала (R)
Общепринятое
условное
Бензилпенициллин
n-Оксибензилпенициллин
2-Пентенилпенициллин
n-Гептилпенициллин
n-Амилпенициллин
Феноксиметилпенициллин
Аллилмеркаптометилпенициллин
G
X
F
K
Дигидро F
V
O
Пенициллины, полученные в результате смешанного (биологического и химического) синтеза (полусинтетические пенициллины)
Тип пенициллина
Общепринятое название
Строение радикала
Кислотоустойчивые препараты
a - Феноксиэтилпенициллин
Фенетициллин
a -Феноксипропилпенициллин
Пропициллин
a -Феноксибензилпенициллин
Фенбенициллин
Пенициллиназоустойчивые препараты
2-6-диметоксифенилпенициллин
Метициллин
Кислото- и пенициллиназаустойчивые препараты
5-метил-3-фенил-4-изоксиазолилпенициллин
Оксациллин
2-этокси-1-нафтилпенициллин
Нафциллин
2-бифенилпенициллин
Дифенициллин
3-О-хлорфенил-5-метил-4-изооксазолил
Клоксациллин
Кислотоустойчивые и широкоспектровые препараты
a - d -(-) Аминобензилпенициллин
Ампициллин
Стрептомицин (Streptomycin) — аминогликозидный антибиотик.
В группу аминогликозидных антибиотиков включаются биологически активные соединения, содержащие в молекулах гликозидные связи. К этим
антибиотикам относятся стрептомицины, неомицины, канамицины, гентамицины, гигромицин и некоторые другие вещества.
Антибиотики этой группы имеют большое практическое значение, многие из них применяются в медицинской практике.
Актиномицет, образующий стрептомицин, впервые выделен в лаборатории микробиологии Раттерского университета в 1943 г.
Первое сообщение о выделении антибиотика было сделано Шатц, Буги и Ваксманом в январе 1944 г. Антибиотик получил название
стрептомицин (от родового названия актиномицетов Streptomyces), а организм, образующий этот антибиотик, был определен как Streptomyces
griseus.
Стрептомицин образуют не только штаммы Act. Streptomycini, но и другие актиномицеты — Act. bikiniensis, Act. raneus, Act. humidus, Act. reticuli,
Act. griseocarneus, Act. mashuensis.
Актиномицет, продуцирующий стрептомицин, как и другие виды актиномицетов, может размножаться с помощью спор или отдельных участков
мицелия.
Культура актиномицетов вообще и Act. streptomycini в частности, весьма вариабельны. На изменчивость актиномицетов оказывают влияние
условия их культивирования и, в особенности, состав среды. На более богатых по составу средах наблюдается более быстрая изменчивость
актиномицетов.
В результате изменчивости продуцента стрептомицина нередко появляются аспорогенные формы, т. е. формы, лишенные воздушного
спороносного мицелия. Как правило, эти варианты или вообще неактивны, или же образуют незначительное количество стрептомицина.
Снижение образования антибиотика наблюдается и у вариантов с усиленной стимуляцией.
Образующиеся в результате изменчивости Act. streptomycini варианты могут отличаться от исходной культуры окраской воздушного мицелия;
последний может быть белым, беловато-палевым, светло-серым, серым и серо-зеленым. Различные варианты отмечаются друг от друга по
величине и форме колоний. Встречаются так же формы, неспособные образовывать стрептомицин. Однако установить какие-либо цитологические
различия между активными и неактивными вариантами не удалось.
Антибиотические свойства стрептомицина. По отношению к стрептомицину все микроорганизмы условно можно разделить на три группы
(Шемякин, Хохлов и др., 1961).
1. Весьма чувствительные микроорганизмы, которые подавляются в большинстве случаев при концентрации стрептомицина 10 мкг/мл. Сюда
можно отнести организмы, принадлежащие к следующим родам: Bacillus, Bordetella, Brucella, Klebsiella, Mycobacterium, Bacteroidum и некоторые
другие.
2. Умеренно чувствительные. Для подавления которых in vitro необходимо иметь концентрацию стрептомицина в пределах 10 – 100 мкг/мл. К
этой группе относятся многие бактерии из родов Aerobacter, Corynebacterium, Diplococcus, Proteus, Staphylococcus, Strepticoccus, Vibrio.
3. Устойчивые формы микробов, для подавления которых необходима концентрация антибиотика, превышающая 100 мкг/мл. Сюда относятся
виды Bacteroides, Clostridium, некоторые виды Proteus, многие виды грибов, дрожжей, риккетсий, вирусы.
Итак, различные организмы по-разному реагируют на присутствие в среде стрептомицина. Степень антимикробного действия антибиотика
также различна в отношении различных видов организмов.
Антибиотическая активность стрептомицина in vitro
Микроорганизм
Концентрация стрептомицина (мкг/мл), вызывающее
подавление
Наиболее
чувствительные
штаммы
Наиболеее
устойчивые
штаммы
Большинство
штаммов
Aerobact . aerogenes
Bac . anthracis
Bac . megatherium
Bac . subtilis
Candida albicans
Clostridium botulinum
Corinebact . giphtheriae
Diplococcus pneumniae
E. coli
Mycob . tuberculosis
Proteus vulgaris
Ps. aeroginosa
Bact . thyphi
Bact . dysenteriae
Bac . cereus
0,300
0,250
0.250
0.056
-
-
0.400
0.500
0.015
0.100
1.000
0,100
0,004
2,000
0,830
1000
10
4
128
-
-
200
50
>1000
12,5
>1000
1000
20
8
2
25
5
2
25
Устойчивы
>>
20
25
25
5
15
50
5
5
1
Наряду с тем, что стрептомицин подавляет рост многих видов микроорганизмов, к нему довольно легко появляется устойчивость, возникают
формы бактерий, резистентные к стрептомицину. По данным Прайса (Price et al., 1947), повышение устойчивости к стрептомицину в 1 000 раз
возникает у золотистого стафилококка всего лишь через три пассажа на бульоне с возрастающими концентрациями антибиотика, а у Bact. typhi
повышение устойчивости в 22 600 раз происходило через 14 пассажей.
Образование устойчивых форм бактерий к стрептомицину происходит также in vivo. Приобретенная к стрептомицину устойчивость сохраняется у
организмов довольно длительное время. С возникновением устойчивости появляются некоторые изменения в характере обмена веществ. Так, у
резистентного к стрептомицину хромогенного микроорганизма происходит резкое изменение его окраски. Стрептомициноустойчивая форма
синегнойной палочки теряет способность образовывать пигмент, изменяются и некоторые другие стороны обмена.
Однако у устойчивых и чувствительных к стрептомицину штаммов бактерий не наблюдается заметных различий в вирулентности.
В ряде случаев под действием стрептомицина в опытах in vitro возникают не только устойчивые к нему штаммы, но и зависимые от
стрептомицина формы, способные развиваться только в присутствии данного антибиотика.
Описаны случаи, когда штаммы менингококка, Mycob. ranae и другие микроорганизмы развиваются лишь на среде, содержащей от 100 до 150
мкг/мл стрептомицина.
Стрептомициноустойчивые и зависимые от стрептомицина штаммы обычно получаются из чувствительных форм микроорганизмов.
Соотношение между чувствительными, устойчивыми и зависимыми от стрептомицина штаммами изображено на рисунке.
Поглощение антибиотиков клетками микробов
Первый этап во взаимодействии микроорганизмов с антибиотиками — адсорбция его клетками. Пасынский и Косторская (1947) впервые
установили, что одна клетка Staphylococcus aureus поглощает примерно 1 000 молекул пенициллина. В последующих исследованиях эти расчеты были
подтверждены. Так, по данным Мааса и Джонсона (1949), приблизительно 10 – 9 М пенициллина поглощается 1 мл стафилококков, причем около 750
молекул этого антибиотика необратимо связываются одной клеткой микроорганизма без видимого эффекта на ее рост.
Игл с сотрудниками (1955) определил, что при связывании бактериальной клеткой 1 200 молекул пенициллина угнетения роста бактерий не
наблюдается. Угнетение роста микроорганизма на 90 % наблюдается в тех случаях, когда клеткой будет связано от 1 500 до 1 700 молекул
пенициллина, а при поглощении до 2 400 молекул на клетку происходит быстрая гибель культуры.
Установлено, что процесс адсорбции пенициллина не зависит от концентрации антибиотика в среде. При низких концентрациях препарата
(порядка 0,03 мкг/мл) он может весь адсорбироваться клетками, и дальнейшее повышение концентрации вещества не поведет к повышению
количества связанного антибиотика.
Имеются данные (Купер, 1954) о том, что фенол препятствует поглощению пенициллина клетками бактерий, однако он не обладает
способностью освобождать клетки от антибиотика.
Пенициллин, стрептомицин, грамицидин С, эритрин и другие антибиотики связываются различными бактериями в заметных количествах. Причем
антибиотики-полипептиды адсорбируются микробными клетками в большей степени, чем, например, пенициллины и стрептомицин.
Булгакова и Полин (1966) установили, что грамицидин С адсорбируется как чувствительными, так и устойчивыми к нему бактериями. Причем
адсорбция этого антибиотического вещества бактериями происходит сразу же после внесения антибиотика в суспензию клеток и достигает
значительных величин (до 500 мкг/мг сухой биомассы).
В присутствии положительно заряженных ионов (Na +, K +, NH +, Mg 2+), а также при рН среды, равном 4, поглощение грамицидина С
бактериальными клетками заметно снижается.
Адсорбированный чувствительными клетками грамицидин С прочно связывается с бактериями и снимается с них лишь при длительной
экстракции подкисленной спиртово-водной смесью.
У устойчивого к антибиотику штамма E. coli при промывании клеток раствором NaCl удается удалить лишь до 30 % адсорбированного
грамицидина С.
Ванкомицин, образуемый Actinomyces orientalis, необратимо и относительно быстро связывается клетками бактерий, чувствительными к нему.
По данным Reunolds (1966), при концентрации антибиотика в среде, равной 30 мкг/мг массы сухих бактерий, около 90 % ванкомицина связывается с
бактериями. Показано, что максимальное связывание ванкомицина бактериальными клетками достигает величин 10 7 молекул антибиотика на
клетку.
Связанные клеткой антибиотики могут проявлять двоякого рода действия: содной стороны, некоторые из них могут действовать как
поверхностно-активные вещества, а с другой стороны, антибиотики, проникая вглубь клетки, нарушают отдельные стороны метаболизма организма.
Гибель клеток под воздействием поверхностно-активных антибиотиков может быть связана с нарушением механизма осмотического
равновесия, имеющего место на поверхности микробной клетки; она может также наступить в результате способности этих веществ, скапливающихся
у поверхности раздела жидкая фаза — микробная клетка, связываться с компонентами клеток.
Экспериментальные данные в этом отношении показали, что изменения в регулировании осмотического давления сопровождаются
разрушением систем клеточной стенки микроба. Нарушение проницаемости клеточной стенки является или результатом прямого вливания
антибиотических веществ, или же может быть результатом вторичных процессов.
Действие антибиотиков как поверхностно-активных веществ может вызывать диссоциацию белка с отделением от него простетических групп
или нуклеиновых кислот. Эти вещества могут также приводить к денатурации белков и, таким образом, непосредственно влиять на энзиматические
системы, связанные с клеточной стенки (инвертазы, фосфатазы, различные дегидрогеназы, цитохромные системы).
Таким образом, если антибиотик обладает способностью нарушать системы, регулирующие осмотические свойства клеточной стенки, иными
словами, если антибиотик выступает в качестве поверхностно-активного соединения, то он может оказывать бактерицидное действие.
К числу антибиотических веществ, механизм действия которых связан с поверхностно-активными свойствами, следует отнести грамицидин С,
тироцидин, полимиксины, а также тетрациклины, если последние применяются в концентрациях, во много раз превышающие бактериостатические.
Вместе с тем, как уже отмечалось выше, антибиотики, попадая в микробную клетку, могут нарушать отдельные этапы метаболизма организма,
подавлять некоторые звенья в цепи биохимических процессов.
Подавление отдельных звеньев в биохимической цепи превращений может происходить как путем необратимого связывания антибиотиком
одного из компонентов реакции, так и в результате конкурентного подавления биологически важных метаболитов клетки.
Если в организме или в среде одновременно присутствуют два вещества — обычный для организма субстрат S и ингибитор I, сходный по
структуре с субстратом и оба они могут вступать в связь с энзимом (Е), как показано в уравнениях (1 и 2):
S+E SE (1)
I+E IE (2), то мы имеем типичный пример конкурентного подавления или конкурентного обмена.
В качестве примера конкурентного обмена можно привести участие сульфаниламина как антиметаболита n-аминобензойной кислоты в витамине
фолиевой кислоты.
Как только сульфаниламид, в случае его присутствии в клетке, включается в фолиевую кислоту вместо ПАБК, ферментативные функции
бактериальной клетки блокируются. Это в свою очередь приводит к нарушению механизма обмена веществ клетки и, вслед за этим, к ее гибели.
В качестве примера конкурентного действия антибиотика при биосинтезе белка можно назвать пуромицин. Этот антибиотик образуется
культурой Act. alboniger.
Анализ химической структуры пуромицина показал, что он представляет собой структурный аналог 3-конечной аминоацилированной группировки
тРНК.
Суммирование имеющихся данных по механизму биологического действия пуромицина дает возможность заключить, что оно выступает в
качестве конкурентного аналога аминоацил-тРНК, заменяя последнюю в реакции с пептидил-тРНК, что приводит к освобождению пептидила в виде
пептидил-пуромицина из рибосомы и, таким образом, прекращая синтез белка (Спирин, Гаврилова, 1971).
Есть указания на то, что окситетрациклин выступает в качестве конкурентного ингибитора дифосфопиридиннуклеотида при действии его на E.
coli.
Установлено, что актитиазовая кислота (антибиотик актиномицетного происхождения) — конкурент витамина биотина, сходного по строению с
кислотой. Вместе с тем необходимо подчеркнуть, что явление конкурентного ингибирования не имеет широкого распространения в механизме
действия антибиотических веществ.
Существует гипотеза, впервые высказанная Ч. Кэвеллито, что биологическая активность многих антибиотиков (бензилпенициллина,
стрептомицина, аллицина, пиоцианина и др.) обусловлена тем, что они вступают в связь с сульфгидрильными группами (-SH) ферментов, превращая
их в неактивные вещества, но такая точка зрения на механизм действия антибиотиков не была строго обоснованной.
Однако появились указания (Gross, Morell, 1967) на то, что механизм биологического действия антибиотика низина связан с взаимодействием
его с сульфгидрильными группами метаболитически важных ферментов (глютатин, ацетилкоэнзим А).
Симбиотические связи бактерий с бобовыми благодаря широкому использованию их в полевом растениеводстве, луговодстве и, частично, в
лесоводстве, изучались весьма интенсивно. Установлено, что не все виды бобовых имеют на корнях клубеньки. При обобщении имеющихся данных,
оказалось, что из 1285 изученных бобовых (в широком понимании этой группы) клубеньки отсутствовали у 166 (13,0 %), в том числе у 77,4 %
изученных цезальпиновых, у 13 % мимозовых и 7 % мотыльковых (Fabaceae) (E. Allen, O. Allen, 1961).
Отсутствие клубеньков на корнях не всегда означает неспособность данного вида бобовых к симбиозу с клубеньковыми бактериями, иногда это
происходит из-за местных условий, неблагоприятных для образований клубеньков, или по тому, что в почве нет соответствующих рас клубеньковых
бактерий. В то же время наличие клубеньков на корнях бобовых не всегда указывает на активную фиксацию азота клубеньковыми бактериями.
Установлено, что многочисленные мелкие белые клубеньки на боковых корнях травянистых бобовых образованы малоэффективной расой
клубеньковых бактерий, неспособной связывать атмосферный азот или фиксирующий его в незначительном количестве, в то время как крупные,
окрашенные в розовый цвет клубеньки на стержневом корне обычно характеризуют энергично идущий процесс усвоения азота.
А процесс естественного отбора и сопряженной эволюции возникло много рас клубеньковых бактерий, способных выступать в эффективные
симбиотические отношения с определенными видами бобовых. Значение отдельных рас клубеньковых бактерий давно было выяснено для
возделываемых видов бобовых, и, в связи с необходимостью в ряде случаев вносить бактериальное удобрение (нитраты), содержащие
соответствующие клубеньковые бактерии, они были разделены на ряд групп в соответствии с пригодностью для определенных видов бобовых.
Принято выделять следующие расы клубеньковых бактерий по их способности к эффективному симбиозу со следующими определенными видами или
группами видов бобовых:
· горох, вика, кормовые бобы;
· фасоль;
· соя;
· люпин, сераделла;
· вигна, магу, арахис;
· нуж;
· клевер;
· люцерна, донник, пажитник;
· эспарцет;
· лядвенец (Вознесенская, 1969).
На самом деле число рас клубеньковых бактерий значительно больше.
Выявлена специфичность рас клубеньковых бактерий в пределах уже установленных групп, в частности в "клеверной группе", например у
клевера несходного, клубеньки возникают лишь при участии особой расы клубеньковых бактерий.
Эта специфичность проявляется также в значительных различиях фиксируемого ими азота в зависимости от вида клевера, с которым они
связаны. В таблице 12 показано, что наиболее эффективные для клеверов лугового и ползучего расы клубеньковых бактерий для клевера
подземного были наименее эффективными, и наоборот. Расы, обеспечивающие фиксацию очень значительных количеств азота при инокуляции ими
клевера подземного, в симбиозе с клевером луговым и ползучим фиксировали незначительное количество азота. Все это обусловило выделение
среди "клеверной группы" трех подгрупп: А — клевера ползучий, луговой, розовый, простертый, земляничный; В — подземный, инкармантный,
скученный, александрийский; С — несходный. Три подгруппы выделяют и среди "люцерновой группы".
Способность отдельных рас клубеньковых бактерий фиксировать атмосферный азот при симбиозе с различными видами клевера (содержание
азота в мг на 8 растений; по White et al., 1953)
Виды клевера
Расы бактерий
№ 1
№ 16
№ 8
№ 13
Клевер луговой
Клевер ползучий
Клевер подземный
51,4
59,6
7,9
34,3
46,5
7,2
2,8
10,5
138,5
1,9
7,0
153,5
Возможность фиксации атмосферного азота клубеньковыми бактериями и количество фиксированного азота определяются также средой —
отсутствием условий, ограничивающих жизнедеятельность бактерий и бобовых растений (высокая кислотность, высокое содержание растворимого
алюминия, плохая аэрация и др.), а также достаточной обеспеченностью фосфором, калием, кальцием, молибденом, серой, кобальтом, водой и др.
Фиксация азота клубеньковыми бактериями снижается по мере увеличения содержания в почве растворимых форм азота, доступных для
бобовых. Большое значение имеют условия освещения, поскольку клубеньковые бактерии получают от бобового углеводы, необходимые им как
энергетический материал для фиксации азота, и потому зависят от фотосинтеза. При затенении резко снижается не только число клубеньков, но и их
размеры, а также предельная глубина их образования.
Клубеньковые бактерии более экономно используют энергию, необходимую для фиксации азота, затрагивая 3 – 4 г углеводов на 1 г азота, в то
время как свободноживущие азотфиксирующие бактерии затрачивают 50 – 100 и более граммов на фиксацию 1 г азота. Это связано с тем, что у
свободноживущих азотфиксаторов фиксация азота происходит в процессе их роста, и потому большое количество энергии потребляется на этот
рост. Кроме того, в целях создания благоприятных условий для активности нитрогеназы — фермента, участвующего в фиксации азота, для снижения
парциального давления кислорода усиливается дыхание, что связано с затратой энергии. Эти расходы энергии отсутствуют у клубеньковых бактерий.
Поскольку фиксация азота происходит в бактероидах, клетках, прекративших рост, а внутри клубеньков создаются благоприятные условия для
активности нитрогеназы. В том числе сниженное содержание кислорода. Очень существенно то, что фиксируемый клубеньковыми бактериями азот на
90 – 95 % передается бобовым растениям. Бобовые, получая связанный азот от клубеньковых бактерий, не зависят или мало зависят от
обеспечения минеральным азотом почвы и потому могут успешно произрастать совместно с другими растениями на почвах, бедных доступными
формами азота.
Количество азота, фиксируемого клубеньковыми бактериями бобовых, сильно варьирует от фитоценоза к фитоценозу, а в пределах конкретных
фитоценозов может изменяться от года к году. Оно определяется участием бобовых в фитоценозах, условиями среды и эффективностью
соответствующих рас бактерий. Для некоторых лугов в Новой Зеландии с травостоями, где преобладает клевер, отмечена фиксация азотом до 450 –
550 кг/га.
Фиксация азота в столь больших количествах возможна лишь в условиях исключительно благоприятного климата Новой Зеландии (равномерное
распределение большого количества атмосферных осадков, отсутствие засух, благоприятные тепловые условия, возможность вегетации в течение
всего года), когда растения в результате применения известкования и внесения удобрений произрастают в условиях благоприятных для них реакций
почвы и обеспечены необходимыми зольными элементами. Однако, даже в Новой Зеландии среднее количество азота, фиксируемого
клубеньковыми бактериями бобовых, входящих в состав луговых травостоев, составляло 185 кг/га (колебания достигали 85 – 340 кг/га от луга к лугу
и в среднем от года к году 145 – 225 кг/га). В годы с более влажным и прохладным летом оно было выше, а в годы с сухим, более теплым летом -
ниже. Данные о сходных количествах фиксируемого азота клубеньковыми бактериями бобовых получены для Ирландии (в среднем 160 кг/га) и
Южной Англии (250 – 270 кг/га) и относятся к лугам, созданным путем посева трав. На природных лугах нашей страны, в травостоях которых
бобовые принимают меньшее участие, количество азота, фиксируемого клубеньковыми бактериями, как правило, не более 30 – 50 кг/га. В посевах
многолетних трав (бобовых или бобовых в смеси со злаками) количество фиксируемого азота обычно не превышает 200 кг/га.
Давно замечено, что бобовые благоприятно влияют на произрастающие совместно с ними злаки и другие растения, в том числе увеличивают
содержание азота в их органах. На основе результатов вегетационных опытов Виртанен пришел к выводу, что такое воздействие связано с
прижизненными выделениями из корней бобовых в почву значительных количеств азотсодержащих соединений. Проверка результатов опытов
Виртанена, проведенная в СССР, Шотландии, США, Австралии, не подтвердила его выводов. Оказалось, что в условиях нормального фотосинтеза
бобовые не выделяют в почву сколь-либо заметных количеств азотистых соединений. Лишь с ослаблением фотосинтеза (при сниженной
интенсивности освещения), когда растения не располагают достаточным количеством углеводов и органических кислот для связывания всего
фиксируемого клубеньковыми бактериями азота, часть его может выделяться в почву. Благоприятное влияние бобовых на другие растения можно
объяснить поступлением в почву азота с их отмирающими органами, у древесных растений — в основном с опадом, у травянистых (в фитоценозах,
используемых как сенокосы и пастбища) — преимущественно с отмирающими подземными органами. На пастбищах злаки получают азот бобовых из
экскрементов скота, поедающих их. Так как бобовые, если фиксация азота клубеньковыми бактериями идет достаточно активно, не поглощают из
почвы азот или поглощают его в незначительных количествах, на долю небобовых растений остается больше доступных форм азота, и потому они
растут лучше с бобовыми, чем в их отсутствие. Совместное произрастание бобовых с небобовыми растениями оказывает благоприятное влияние на
фиксацию азота клубеньковыми бактериями, так как в результате поглощения небобовыми азота из почвы содержание его доступных форм
снижается до незначительных величин, что стимулирует фиксацию азота.
Биологическая фиксация азота
Баланс доступного растениям азота на Земном шаре поддерживается за счет деятельности особой группы организмов — так называемых
азотфиксаторов. В экономике природы процессам биологической фиксации азота принадлежит исключительная роль, которая по значению вполне
равнозначна процессу фотосинтеза.
В группу азотфиксаторов входят свободно живущие организмы, а также организмы, способные существовать лишь в симбиозе с другими
видами.
Первой в ряду свободно живущих азотфиксаторов открыта анаэробная спороносная бактерия Clostridium pasterianum. Это открытие
принадлежит русскому ученому С. Н. Виноградскому (1893). Через 8 лет (1901) М. Бейеринком был открыт аэробный микроорганизм, названный
азотбактером (Azotobacter).
Оба организма являются сапрофитами. Для восстановления молекулярного азота они используют энергию, получаемую ими при окислении
глюкозы и других органических соединений (например, маннита). На каждый грамм сброженной глюкозы азотбактер накапливает около 15 мг
связанного азота, тогда как Clostridium — не более 2 – 3 мг.
Выделив азотбактер, Бейринк обратил внимание на большое сходство свойств этого микроорганизма со свойствами фотосинтезирующей
бактерии Chromatium . В настоящее время установлено, что способность фиксировать азот широко распространена у различных видов бактерий.
Эта функция свойственна, в частности, сульфатредуцирующим бактериям, развитие которых осуществляется в анаэробных условиях. Способностью
ассимилировать молекулярный азот обладает также пурпурная бактерия Rhodospirillum rubrum (Чест и Камен).
К свободно живущим азотфиксаторам принадлежат также синезеленые водоросли (Nostoc, Phormidium). Осуществляемая ими ассимиляция
молекулярного азота имеет в особенности большое значение для пресноводных бассейнов, для развития растений риса на заливаемых водой
плантациях и т. п. Благодаря своей крайне четко выраженной автотрофности синезеленые водоросли способны заселять голые скалы; они
развиваются на вулканической пыли, пензе и т. д.
Общий уровень азотфиксирующей активности свободно живущих организмов невысок. В зависимости от вида и условий существования они
накапливают в год от 10 до 30 – 40 кг связанного азота на гектар.
Основную роль в пополнении убыли запасов связанного азота выполняют бактерии — симбиоты, в первую очередь Bacterium radicicola. В
настоящее время известно, что кроме бобовых имеется еще около 100 видов других растений, на корнях которых развиваются специфические для
каждого растения клубеньковые бактерии.
Химическая природа взаимодействия бобовых с клубеньковыми бактериями изучена неполно, в связи с чем ряд факторов в этой области не
находит еще объяснения. Например, установлено, что клубеньковые бактерии способны восстанавливать молекулярный азот только при
взаимодействии с корнями бобовых растений. Этой способности лишены бактерии, культивируемые в искусственных средах. Клубеньковые бактерии
развивались на корнях бобовых растений и в том случае, если последние служили подвоем, а привоем — любое другое растение. В тех вариантах,
где бобовые служили привоем, а подвоем — различные небобовые растения, бактерии не развивались.
Все это показывает, что тканям бобовых должны быть свойственны определенные особенности.
Представитель экспериментального направления в физиологии растений. Замечательный французский ученый Жан Батист Буссенго первый
широко использовал в своих исследованиях по питанию метод выращивания растений в вегетационных сосудах. Точные эксперименты позволили
Буссенго опровергнуть представления Либиха об азотном питании растений. Буссенго первый отметил специфические особенности бобовых
растений как азотсобирателей , а вслед за тем Гельригель открыл, что эту роль бобовые выполняют в симбиозе с клубеньковыми бактериями.
Большое значение имели исследования русского ботаника М. С. Воронина, который первый сформулировал представление о клубеньках как о
болезненных образованиях, возникающих в результате заражения корней.
Симбиоз корней высших растений с грибами носят название микориз, симбиозы с бактериями — бактериориз. В зависимости от формы
симбиотрофизма различают микоризы экто- и эндотрофные. Первые развиваются на поверхности корней, вторые проникают внутрь ткани.
Классическим примером бактериотрофизма является взаимодействие бобовых растений с клубеньковыми бактериями.
Исследования микробиологов, проведенные в последние годы, значительно расширили представления о значении симбиотрофизма в
процессах корневого питания растений.
Число микробных телец, приходящихся на 1 г почвы, исчисляется многими сотнями миллионов и даже миллиардами. Некоторое представление
об этом дают цифры, заимствованные из работ Н. А. Красильникова:
Число микроорганизмов в 1 г почвы
Вес микробных тел в пахотном слое, кг /га
Бактерии
Грибы
Актиномицеты
Водоросли
1 ` 10 9
1 ` 10 5
1 ` 10 5
1 ` 10 3
600
60
8
160
Почвенные микроорганизмы сосредоточены в основном в зоне размещения корней.
Важное значение азотфиксирующих бактерий диктует необходимость обеспечения наиболее благоприятных условий для их развития и
физиологической деятельности.
Один из путей решения этой важной практической задачи состоит в увеличении численности микробного населения почвы с помощью
бактериальных удобрений.
Данное мероприятие в равной степени оправдывает себя в отношении, как клубеньковых бактерий, так и свободно живущих азотфиксаторов.
Дело в том, что даже при длительной культуре бобовых растений, почвы, занятые ими содержат нередко недостаточное количество Bact.
radicicola, в результате чего на корнях образуется мало клубеньков, либо они не образуются вовсе. В этих условиях бобовые не обогащают почву
азотом, а аналогично другим растениям истощают имеющиеся в ней азотистые соединения.
Искусственное обогащение почвы клубеньковыми бактериями оказывает весьма благоприятное влияние на азотный баланс почвы и на
развитие бобовых и других растений севооборота. Препарат клубеньковых бактерий, который называется нитрагином, вносят вместе с семенами
бобовых при посеве. При приготовлении нитрагина следует учитывать специфичность клубеньковых бактерий.
Воздействие внешних факторов на рост и развитие растений
Измерение скорости роста, проведенное немецким физиологом Ю. Саксом (1872), позволило установить определенные закономерности. В
начальный период темпы роста, как правило, низкие. Затем рост усиливается и идет с большой скоростью (период большого роста), а затем снова
замедляется. В результате рост (увеличение размера) клетки, органа или организма в целом может быть изображен в виде Ы-образной кривой. Эта
закономерность имеет общебиологическое значение и справедлива по отношению к росту всех живых организмов, включая и человека.
Анализируя полученную кривую, можно ее разделить на 3 участка:
· фаза, когда рост изменяется экспоненциально (логарифмически);
· фаза, когда рост изменяется линейно;
· фаза торможения роста.
Именно период, когда рост прямо (линейно) возрастает, называется периодом большого роста.
Внешние условия оказывают на рост как прямое, так и косвенное влияние. Последние связаны с тем, что скорость роста зависит от
интенсивности всех остальных физиологических процессов, воздушного и корневого питания, снабжения водой, напряженности процессов обмена
веществ и энергии. В этой связи влияние внешних условий может сказаться на интенсивности роста через изменения любого из указанных процессов.
При этом далеко не всегда причина того или иного влияния можно с достаточной точностью установить, поскольку в естественной обстановке
влияние отдельных факторов тесно взаимосвязано.
Температура. Рост растений возможен в сравнительно широких температурных пределах. Растения ранневесенней флоры растут при
температуре даже несколько ниже 0 °С. Есть растения, для которых верхняя температурная граница роста несколько превышает 50 °С. для каждого
вида растения, в зависимости от его особенностей и, главным образом, от географического происхождения, характерны определенные
температурные границы, в которых возможно протекание ростовых процессов. Различают три кардинальные температурные точки: минимальная
температура, при которой рост только начинается, оптимальная — наиболее благоприятная для ростовых процессов, максимальная, при которой
рост прекращается. С повышением температуры от минимальной до оптимальной скорость роста резко возрастает. Так, скорость роста проростков
гороха при повышении температуры от 0 до 10 °С возрастает в 9 раз, от 10 до 20 °С — в 2,5 раза, от 20 до 30 °С — всего в 1,9 раза. Оптимальные
температуры могут быть неодинаковыми для роста разных органов одного и того же растения. Как правило, оптимальная температура для роста
корневых систем ниже по сравнению с надземными органами. Для роста боковых побегов оптимальная температура ниже по сравнению с ростом
главного стебля. Установлено, что растения интенсивно растут в ночной период суток. Для роста многих растений благоприятной является сменная
температура в течение суток — днем повышенная, а ночью — пониженная. Это явление Ф. Вент назвал термопериодизмом. Явление
термопериодизма хорошо проявляется на культуре томатов. Показано (Н. И. Якушкина), что пониженные ночные температуры ускоряют рост
корневой системы и боковых побегов у растений. Такое влияние может быть объяснено тем, что при понижении температуры более активно
работают ферменты, катализирующие распад крахмала на сахара. В листьях образуются растворимые транспортные формы углеводов, легко
передвигающиеся к точкам роста корня и боковых побегов, благодаря чему их рост усиливается.
Содержание воды. В процессе роста растения особенно чувствительны к недостатку воды. Уменьшение содержания воды в почве приводит,
естественно, и к уменьшению содержания ее в растении, а это, в свою очередь, резко тормозит процессы роста. Снижается деление клеток и
особенно их рост растяжением. Наибольшая насыщенность водой требуется для процессов роста. Насыщенность клетки или ткани растений водой
называют гидратурой, она выражается в процентах. Рост клеток идет лишь в том случае, если гидратура не падает ниже 95 %. Для того чтобы
поддержать такую гидратуру, точки роста надземных органов растений защищены смыкающимися листочками с хорошо развитой кутикулой. Точки
роста корня не имеют подобной защиты и поэтому требуют повышенной влажности почвы для своего роста.
Свет. Растения используют свет двумя путями: первый, где свет служит источников энергии для синтеза органических веществ (фотосинтез);
второй, где свет — сигнал или источник информации. Во втором случае энергия света может быть на несколько порядков ниже, чем в первом. Свет
оказывает большое и разностороннее влияние на темпы и характер роста, как отдельных органов, так и растительного организма в целом. При этом
на разные стороны ростовых процессов влияние света проявляется неоднозначно. Так свет необходим для протекания процесса фотосинтеза, и,
поэтому, накопление массы растения без света не идет. Вместе с тем, рост клеток растяжением может идти в темноте, более того, на свету этот
процесс тормозится. Свет оказывает большое влияние на формообразовательные процессы. Этиолированные проростки, выросшие в темноте,
характеризуются рядом анатомических и морфологических особенностей. В отсутствие света происходит упрощение анатомической структуры
стебля. Слабо развиваются ткани центрального цилиндра, механические ткани. Вместе с тем, растяжение клеток в темноте идет очень интенсивно. В
результате образуются длинные, вытянутые стебли. Листья редуцированы, у двудольных растений вместо листовой пластинки образуются лишь
небольшие чешуйки.
Этиолированные проростки имеют слегка желтоватый оттенок. По-видимому, более быстрое вытягивание стебля и корня этиолированных
проростков выработалось в процессе эволюции, так как в большинстве случаев прорастание семян в почве происходит в отсутствие света, и эти
особенности, а также отсутствие листьев, облегчают проростку проникновение через слой почвы. Возможно, что вытягивание стебля в отсутствие
света является следствием отсутствия ингибиторов роста. В темноте образуются много гормонов ауксинов. Нарушение соотношения ауксинов и
ингибиторов вызывает несбалансированный рост. При выходе проростков на поверхность почвы происходят их внутренние и внешние изменения. В
темноте у проростков двудольных растений гипокотиль изогнут, что защищает точку роста в почве от повреждений. Под влиянием света этот изгиб
("крючок") выпрямляется. На свету рост стебля тормозится, рост листьев усиливается, и они принимают обычную форму. Под влиянием света
происходят анатомические изменения стебля, дифференцируется эпидермис, появляются волоски, изменяется окраска — синтезируется хлорофилл.
Эти изменения получили название фотоморфогенеза.
Говоря о воздействии света, необходимо остановиться на влиянии круглосуточного освещения на процессы роста. Опыты по выращиванию
растений при свете электрических ламп (светокультура) показали, что рост многих растений при круглосуточном освещении идет значительно
интенсивнее, особенно при правильном подборе качества света (тип ламп). Так, при выращивании сеянцев древесных культур (дуб, сосна) на
непрерывном освещении темпы их роста возрастают в 1,5 – 2 раза (В. М. Леман). Такие однолетние растения, как горох и фасоль, также
характеризуются очень интенсивным ростом в условиях круглосуточного освещения. Однако есть растения, на рост которых круглосуточное
освещение оказывает отрицательное влияние. В некоторых случаях круглосуточное освещение вызывает явления, сходные с теми, которые обычно
являются следствием недостатка света. Особенно вредное влияние круглосуточного освещения проявляется при высокой ночной температуре.
Снабжение кислородом. Процессы роста требуют затрат энергии, источником которой служит процесс дыхания. В этой связи понятна
необходимость кислорода. При снижении концентрации ниже 5 % рост тормозится. Это происходит не только из-за нарушения энергетического
баланса, но и в силу накопления продуктов анаэробного обмена (спирт, молочная кислота).
Минеральное питание. Для нормального протекания ростовых процессов необходимо достаточное снабжение всеми необходимыми
минеральными элементами. Особенно специфична роль снабжения растений азотом. Это связано не только с тем, что азот входит в состав белков и
нуклеиновых кислот, но и с образованием двух основных групп гормонов, регулирующих ростовые процессы (ауксины, цитокинины).
|